Protein Expression and Codon 72 Polymorphism of TP53 Gene in Triple Negative Breast Cancer

A subgroup of tumor that has received attention is triple-negative breast cancer (TNBC), which presents phenotype of negative estrogen receptor, negative progesterone receptor and has no overexpression of HER2. TP53 acts as a tumor suppressor limiting the proliferation of damaged cells. A polymorphic site (rs1042522) of TP53 encodes either an arginine or a proline amino acid, but its biological significance remains unclear. This study aimed to investigate this variant and its expression in search for a possible involvement in TNBC susceptibility and clinical outcome. Genetic polymorphism was evaluated in 50 patients and 115 controls by PCR based methodology and immunohistochemistry was done with monoclonal antibody. Case-control study showed no positive or negative association (OR= 0.95; CI95%= 0.48-1.89). Comparison of genotypes and clinical outcome showed no significant results. Despite most of patients presented p53 positive staining by immunohistochemistry, there was no significant association in relation to prognostic parameters. Results demonstrated a lack of association between codon 72 polymorphism, susceptibility and prognosis of TNBC. Immunohistochemistry analysis should be done more carefully, since most of the patients had the somatic mutation of p53, which could be an indicator of prognostic value in TNBC.

Seleção de basidiomicetos proteolíticos / Selección de basidiomicetos proteolíticos / Selection of proteolytic basidiomycetes

Basidiomicetos têm sido amplamente utilizados como produtores de enzimas, no entanto são pouco explorados quanto a sua capacidade de produção de proteases. Estes fungos são reconhecidos pelas suas propriedades antitumorais, hipocolesterolêmicas, antimutagênicas, antioxidantes entre outras. Assim, a associação destas propriedades aos derivados do leite pode potencializar estes produtos como alimentos funcionais. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi selecionar basidiomicetos produtores de proteases, com potencial uso no processo de fabricação de derivados do leite. Foram utilizadas 27 linhagens de fungos crescidas em meio mínimo adicionado de 0,2% de caseína. A atividade proteolítica foi verificada pela formação de halo pela adição de uma solução saturada de (NH4)2SO4. Concluiu-se que a produção de proteases não apresenta relação com o crescimento micelial. O melhor produtor de proteases é a linhagem Lentinula edodes U8/1, seguida por Pleurotus sp (U2/9, U6/10 e U2/11). Os basidiomicetos Agaricus blazei (U4/3), Agaricus sp (U5/1), Flamulina sp (U5/4), Lycoperdon sp (U8/8), Agaricus blazei (U2/7), Agaricus blazei (U7/2), Agaricus blazei (U7/4) e Agaricus blazei (U7/5) não produzem proteases suficientes para serem medidas pela metodologia. Desta forma, estes resultados embasam o uso de Lentinula edodes e Pleurotus sp para o desenvolvimento de potenciais aplicações na hidrólise de proteínas em alimentos.

Basidiomycetes have been widely used as enzyme producers, but are poorly explored about their ability to produce protease. These fungi are known as antitumor, cholesterol-lowering, antimutagenic, antioxidant among other biological activities. Thus, the combination of basidiomycete properties to dairy products can improve them as functional foods. Therefore, the objective of this work was to screen basidiomycete protease producers to prospect the use of these fungi on dairy products. 27 basidiomycete strains grown on minimal medium supplemented with 0.2% casein were used. The proteolytic activity was verified by halo formation after a (NH4)2SO4 saturated solution addition on the culture medium. The production of proteases is not associated with mycelial growth. The best producers of proteases is Lentinula edodes U8/1 and after Pleurotus sp (U2/9, U6/10 e U2/11). The basidiomycetes of Agaricus blazei (U4/3), Agaricus sp (U5/1), Flamulina sp (U5/4), Lycoperdon sp (U8/8), Agaricus blazei (U2/7), Agaricus blazei (U7/2), Agaricus blazei (U7/4) and Agaricus blazei (U7/5) do not produce enough proteases to be measured by the methodology. Thus, these results support the use of Lentinula edodes and Pleurotus sp as potencial basidiomycetes for protein hydrolysis on food.

Basidiomicetos han sido ampliamente utilizados como productores de enzimas, pero poco exploradas en su capacidad de producción de proteasa. Estos hongos son reconocidos por sus propiedades antitumorales, reductor de colesterol, antimutagénicos, antioxidantes entre otras. Así, la asociación de estas propiedades a los derivados de la leche puede potencializar estos productos como alimentos funcionales. En este sentido, el objetivo de este trabajo fue seleccionar basidiomicetos productores de proteasas, con potencial uso en el proceso de fabricación de productos lácteos. Se utilizó 27 cepas de hongos crecidos en medio mínimo adicionado de 0,2% de caseína. La actividad proteolítica fue verificada por formación de halo por la adición de solución saturada de (NH4)2SO4. Se concluyó que la producción de proteasas no presenta relación con el crecimiento del micelio. El mejor productor de proteasas es la cepa de Lentinula edodes U8/1, seguida por Pleurotus sp (U2/9, U6/10 y U2/11). Los basidiomicetos Agaricus blazei (U4/3), Agaricus sp (U5/1), Flamulina sp (U5/4), Lycoperdon sp (U8/8), Agaricus blazei (U2/7), Agaricus blazei (U7/2), Agaricus blazei (U7/4) y Agaricus blazei (U7/5) no producen proteasas suficientes para que sean medidos por la metodología. Por lo tanto, estos resultados apoyan el uso de Lentinula edodes y Pleurotus sp para el desarrollo de potenciales aplicaciones en hidrólisis de proteínas en alimentos.

Produção de biomassa, proteases e exopolissacarídeos por Pleurotus ostreatus em cultivo líquido / Producción de biomasa, proteasas y exopolisacáridos por Pleurotus ostreatus en cultivo líquido / Biomass, exopolysaccharide and protease production by Pleurotus ostreatus in liquid cultivation

A renina é um complexo natural de enzimas (endopeptidases aspárticas) utilizada na produção de queijos, extraída principalmente de estômagos de bezerros jovens. A maior demanda por queijos e o alto custo da renina têm incentivado a procura de fontes alternativas de proteases. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi verificar as condições de tempo e temperatura para a produção de biomassa, exopolissacarídeos (EPS) e proteases por Pleurotus ostreatus em cultivo líquido. O micélio foi crescido em meio Pontecorvo, enriquecido com proteína isolada a 22, 25 ou 28oC, com amostragens aos 3, 6, 9, 14 e 17 dias de cultivo. A biomassa foi separada por centrifugação; EPS foram determinados por precipitação com etanol e a atividade proteolítica determinada pela ação do extrato enzimático sobre caseína solúvel alcalina 1% (m/v). Verificou-se que tanto o tempo quanto à temperatura afetaram (p<0,05) a produção de biomassa, EPS e proteases. Concluiu-se que a maior produção de biomassa de P. ostreatus ocorre após nove dias de cultivo a 25ºC; a produção de EPS aumenta com a ampliação do tempo de cultivo, com maior produção a 22ºC; e a máxima produção de proteases ocorre aos 14 dias de cultivo a 28ºC.

Rennet is a natural complex of enzymes (aspartic endopeptidases) and is often used in the production of cheese. Those enzymes (proteases) are extracted from abomasums of young ruminant animals. The high cheese demand associated with the high curdle cost have been stimulated the searching for alternative protease sources. The objective of this study was to verify the time and temperature conditions for biomass, exopolysaccharide (EPS) and protease production by Pleurotus ostreatus in liquid cultivation. The mycelium was grown in Pontecorvo medium added with isolated soy protein (5%) and maintained at 22, 25 or 28oC, with samplings at 3, 6, 9, 14 or 17 days of cultivation. The biomass was separated by centrifugation, EPS were separated by ethanol precipitation and the proteolytic activity was determined by enzymatic extract action on alkaline soluble casein 1% (m/v). It was verified that time and temperature affect (p<0.05) biomass, EPS and protease production. Most of P. ostreatus biomass production occurs after nine days of cultivation at 25°C. EPS production rise with increasing of cultivation time, with higher production at 22°C. Higher protease activity occurs at 28°C on 14 days of cultivation.

La renina es un complejo natural de enzimas (endopeptidasas aspárticas) utilizada en la producción de quesos, extraída principalmente de estómagos de becerros jóvenes. La mayor demanda por quesos y el alto costo de la renina ha incentivado la búsqueda de fuentes alternativas de proteasas. Así que, el objetivo de esta investigación fue verificar las condiciones de tiempo y temperatura para la producción de biomasa, exopolisacáridos (EPS) y proteasas por Pleurotus ostreatus en cultivo líquido. El micelio creció en medio a Ponte corvo, enriquecido con proteína aislada a 22, 25 o 28ºC, con muestras a los 3, 6, 9, 14 y 17 días de cultivo. Se separó la biomasa por centrifugación; EPS fueron determinados por precipitación con etanol y la actividad proteolítica determinada por la acción del estrato enzimático sobre caseína soluble alcalina 1% (m/v). Se verificó que tanto el tiempo como la temperatura afectaron (p<0,05) a la producción de biomasa, EPS y proteasas. Se concluye que la mayor producción de biomasa de P. ostreatus ocurre tras nueve días de cultivo a 25ºC; la producción de EPS aumenta con la ampliación del tiempo de cultivo, con mayor producción a 22ºC; y la máxima producción de proteasas ocurre a los 14 días de cultivo a 28ºC.